农杆菌菌株GV3101(pMP90RK)说明书
1
简要介绍
本菌种具有利福平、庆大霉素和卡那霉素。引进后视为第一代。用接种环接种至3mL YEB(50μg/ml Rif、50μg/ml Gent和50μg/ml Kana)液体培养基中28度培养至OD600=0.50,视为第二代,按照照1:1的体积比加入50%甘油,按照每管200ul的量分装至1.5 mL的EP管中,-80度保存。再按照10%的接种量接种至100 mL YEB(50μg/ml Rif、50μg/ml Gent和50μg/ml Kana)培养基中37度培养至OD600=0.50,视为第三代。按照1:1的体积比加入50%甘油,按照每管1mL的量分装至1.5 mL的EP管中,-80度保存。
2
使用方法
(1) YEB(50μg/ml Rif、50μg/ml Gent和50μg/ml Kana)培养基配方:牛肉浸膏
5 g/L ,酵母浸膏 1 g/L ,蛋白胨 5 g/L
,蔗糖 5 g/L ,MgSO4·H2O 0.5 g/L ,PH 7.0。121℃ 25min灭菌后,待培养基温度至40℃以下,加入无菌的利福平、庆大霉素和卡那霉素抗生素至浓度为50μg/ml。
(2) 用接种环接种至3mL YEB(50μg/ml Rif、50μg/ml Gent和50μg/ml Kana)培养基液体培养基中28度培养至OD600=0.50,按照照1:1的体积比加入50%甘油,按照每管200ul的量分装至1.5 mL的EP管中,-80度保存。
(3) 按照10%的接种量接种至100 mL YEB(50μg/ml Rif、50μg/ml Gent和50μg/ml Kana)培养基培养基中28度培养至OD600=0.50,按照1:1的体积比加入50%甘油,按照每管1mL的量分装至1.5 mL的EP管中,-80度保存。
(4) 我们推荐保存2代,视为安全保菌方式。
注:如果没有利福平、庆大霉素和卡那霉素三种抗生素,可不用加利福平或庆大霉素,但卡那霉素必须的。推荐您购买瑞楚生物进口分装抗生素。