货号 | 价格 | |
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25ml/100ml | R20032 | ¥120.00 |
吖啶橙(AO)-EB双染色试剂盒
产品描述
吖啶橙(AO)-EB双染色试剂盒包括染色液和缓冲溶液,常用于细胞凋亡的检测。3,6-(二甲胺基)吖啶盐酸盐,分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12 g/mol,是一种荧光色素,其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光,与DNA结合量少发绿色荧光,与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。因此,在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染,因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间,这样在DNA复制过程中,会使DNA链增加或缺失一个碱基,造成移码突变。
组分
组分 | 1 Kit |
Component A: 染色液 | 25mL |
Component B:10×Buffer | 100mL |
Protocol | 1 |
保存条件
2-8℃ 条件下可保存一年。
步骤
1. 收集细胞(如采用流式检测时需要固定细胞),用1×Buffer清洗细胞1次,加入适量的1×Buffer重悬细胞,调整细胞浓度至10^6/ml的密度。
2. 取适量的细胞悬液和染色液混合,按照细胞悬液:染色液=19:1的体积比混合,轻轻混匀。
3. 室温避光染色15min,然后滴加一定量的染色后的细胞悬液于载玻片上,盖上盖玻片,于荧光显色显微镜上观察。4. 荧光显微镜激发光为488nm,滤光片515nm条件下观察。
结果判定
正常细胞 被染成绿色荧光
死亡细胞 被染成桔黄色荧光
凋亡细胞 可见黄绿色颗粒或胞质芽状突起
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